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      金相顯微鏡成像原理簡介
      1. [日期:2014-04-28 查看次數:4368]
      1.金相顯微鏡的成像原理,
      金相顯微鏡的成象放大部分主要由兩組透鏡組成。靠近觀察物體的透鏡叫物鏡,而靠近眼睛的透鏡叫目鏡。通過物鏡和目鏡的兩次放大,就能將物體放大到較高的倍數,見圖1,顯微鏡的放大光學原理圖。物體AB置于物鏡前,離其焦點略遠處,物體的反射光線穿過物鏡折射后,得到了一個放大的實象A1B1,若此象處于目鏡的焦距之內,通過目鏡觀察到的圖象是目鏡放大了的虛象A2B2。

      2.金相顯微鏡的放大倍數
      物鏡的放大倍數M物=A1B1/AB≈L╱F1
      目鏡的放大倍數=A2B2/A1B1≈D╱F2
      兩式相乘:M物×M目=A1B1/AB×A2B2/A1B1=A2B2/AB
      =L╱F1×D╱F2=L×250╱F1×F2=M總
      式中:L—為光學鏡筒長度(即物鏡后焦點到目鏡前焦點的距離)
      F1—物鏡的焦距。  F2—目鏡的焦距
      D—明視距離(人眼的正常明視距離為250mm)
      即顯微鏡總的放大倍數等于物鏡放大倍數和目鏡放大倍數的乘積。一般金相顯微鏡的放大倍數最高可達1600到2000倍。
      由此可看出:因為L光學鏡筒長度為定值,可見物鏡的放大倍數越大,其焦距越短。在顯微鏡設計時,目鏡的焦點位置與物鏡放大所成的實象位置接近,并使目鏡所成的最終倒立虛象在距眼睛250毫米處成象,這樣使所成的圖象看得很清楚。
      顯微鏡的主要放大倍數一般通過物鏡來保證,物鏡的最高放大倍數可達100倍,目鏡的最高放大倍數可達25倍。放大倍數分別標注在物鏡和目鏡各自的鏡筒上。在用金相顯微鏡觀察組織時,應根據組織的粗細情況,選擇適當的放大倍數,以使組織細節部分能觀察清楚為準,不要只追求過高的放大倍數,因為放大倍數與透鏡的焦距有關,放大倍數越大,焦距越小,會帶來許多缺陷。
      3.透鏡象差:
      透鏡象差就是透鏡在成象過程中,由于本身幾何光學條件的限制,圖象會產生變形及模糊不清的現象。透鏡象差有多種,其中對圖象影響最大的是球面象差、色象差和象域彎曲三種。
      顯微鏡成象系統的主要部件為物鏡和目鏡,它們都是由多片透鏡按設計要求組合而成,而物鏡的質量優劣對顯微鏡的成象質量有很大影響。雖然在顯微鏡的物鏡、目鏡及光路系統等設計制造過程中,已將象差減少到很小的范圍,但依然存在。
      (1)球面象差:
      1)產生原因:球面象差是由于透鏡的表面呈球曲形,來自一點的單色光線,通過透鏡折射以后,中心和邊緣的光線不能交于一點,靠近中心部分的光線折射角度小,在離透鏡較遠的位置聚焦,而靠近邊緣處的光線偏折角度大,在離透鏡較近的位置聚焦。所以形成了沿光軸分布的一系列的象,使圖象模糊不清。這種象差稱球面象差,見圖2所示。

      2)校正方法:
      a 采用多片透鏡組成透鏡組,即將凸透鏡與凹透鏡組合形成復合透鏡,產生性質相反的球面象差來減少。
      b 通過加光欄的辦法,縮小透鏡的成象范圍。因球面象差與光通過透鏡的面積大小有關。
      在金相顯微鏡中,球面象差可通過改變孔徑光欄的大小來減小。孔徑光欄越大,通過透鏡邊緣的光線越多,球面象差越嚴重。而縮小光欄,限制邊緣光線的射入,可減少球面象差。但光欄太小,顯微鏡的分辨能力降低,也使圖象模糊。因此,應將孔徑光欄調節到合適的大小。
      (2)色象差:
      1)產生原因:色象差的產生是由于白光是由多種不同波長的單色光組成,當白光通過透鏡時,波長愈短的光,其折射率愈大,其焦點愈近。而波長越長,折射率越小,其焦點愈遠,這樣一來使不同波長的光線,形成的象不能在同一點聚焦,使圖象模糊所引起的象差,即色象差。見圖3所示。
      2)校正方法:可采用單色光源或加濾色片或使用復合透鏡組來減少。

      (3)象域彎曲:
      1)產生原因:垂直于光軸的平面,通過透鏡所形成的象,不是平面而是凹形的彎曲象面。稱象域彎曲。見圖4所示。
      2)校正辦法:象域彎曲的產生,是由于各種象差綜合作用的結果。一般的物鏡或多或少地存在著象域彎曲,只有校正極佳的物鏡才能達到趨于平坦的象域。

      4.物鏡的數值孔徑
      物鏡的數值孔徑用NA表示(即Numderical Apertuer),表示物鏡的聚光能力。數值孔徑大的物鏡,聚光能力強,即能吸收更多的光線,使圖象更加明顯,物鏡的數值孔徑NA可用公式表示為:
      NA=n·sin φ
      其中:n—是物鏡與樣品間介質的折射率
      φ—通過物鏡邊緣的光線與物鏡軸線所成角度,即孔徑半角。
      可見,數值孔徑的大小,與物鏡與樣品間介質n的大小有關,以及孔徑角的大小有關。見圖5所示。

      當物鏡與物體之間的介質為空氣時,
      光線在空氣中的折射率為n=1,
      若物鏡的孔徑半角為30º,
      則數值孔徑為:
      NA=n sinφ=1×sin30º=0.5
      若物鏡與物體之間的介質為松柏油時,
      介質的折射率n=1.52,
      則其數值孔徑為:
      NA=n sinφ=1.52×sin30º=0.76 
      物鏡在設計和使用中,指定以空氣為介質的稱干系物鏡或干物鏡,以油為介質的稱為油浸系物鏡或油物鏡。干物鏡的n=1,sinφ值總小于1,故數值孔徑NA小于1,油物鏡因n=1.5以上,故數值孔徑NA大于1。物鏡的數值孔徑的大小,標志著物鏡分辨率的高低,即決定了顯微鏡分辨率的高低。
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